卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，病死率居女性生殖系统恶性肿瘤首位。手术联合以铂类药物为基础的化疗是其治疗的主要手段，已证实卵巢癌一线化疗药物顺铂诱导肿瘤细胞程序性死亡是该药作用的主要机制，而化疗过程中肿瘤细胞对药物逐渐产生耐药是不能控制疾病进展的主要原因之一，因此提高顺铂对耐药卵巢癌细胞的程序性死亡诱导能力成为逆转耐药性的核心策略。

　　本课题分基础实验与临床研究两部分基于细胞自噬的机制对卵巢癌化疗耐药进行了较为系统深入的研究，该系列研究主要在福建省自然科学基金（编号2014J01293、2016J01503）与福建省医学创新课题（编号2012-CX-6）资助下完成。第一部分：基础研究。选择人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP，在国内外首次将相关基因EZH2、Beclin1 、Clock过度表达或RNA干扰部分沉默的质粒利用脂质体分别成功转染上述肿瘤细胞，通过G418筛选获得稳定表达株后利用电子显微镜、流式细胞仪与倒置荧光显微镜进行观察，Western blot、RT-PCR、MTT、荧光染色及Transwell小室等技术方法进行检测自噬对肿瘤细胞株体外增殖、侵袭及转移的影响；进一步在不同作用机制化疗药物（顺铂、吉西他滨、异环磷酰胺及多西他赛）的作用下检测卵巢癌细胞株自噬水平改变对化疗药物敏感性的影响及其可能的细胞作用通路。第二部分：临床研究。对卵巢浆液性肿瘤患者的癌组织及相应癌旁组织进行细胞自噬相关基因与蛋白检测，通过从临床分期、病理分级、盆腔转移及治疗后长期随访等多方面进行观察和评价，以评估卵巢癌患者手术预后的相关因素，从而指导卵巢癌辅助化疗及临床监测随访的应用实施。研究结果表明：（1）抑制EZH2的表达可明显抑制细胞自噬的发生，细胞衰老通路的相关蛋白P14ARF、P16INK4a、P53、Rb、P21表达上调，CDK1、CDK2、H3K27me3表达下调，细胞呈衰老特征，G0/G1期比值明显升高，提示干扰EZH2的表达能逆转SKOV3/DDP细胞株对顺铂的耐药性，其机制与调节细胞衰老通路有关；（2）自噬基因Beclin1能够减弱卵巢癌SKOV3/DDP细胞的体外侵袭和转移能力，其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖、降低VEGF和MMP-9的表达有关；Beclin1基因过度表达能抑制卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖，其机制可能与其影响血管生成素（Ang）及其Tie-2受体的异常表达和平衡失调有关；（3）在卵巢癌SKOV3/DDP细胞株中抑制Beclin1表达可通过促进不同化疗药物诱导的细胞凋亡并最终提高肿瘤细胞对上述药物的化疗敏感性，线粒体凋亡途径在改变Beclin1基因表达促进抗癌药物诱导SKOV3/DDP细胞凋亡的过程中发挥了重要作用；（4）抑制节律调节基因Clock的表达可通过影响相关耐药基因P-gp及MRP2的表达来逆转卵巢癌SKOV3/DDP细胞株对顺铂的耐药性，细胞自噬在这一过程中发挥了重要作用；（5）通过对人卵巢浆液性癌组织中Beclin1与LC3的检测并通过生存曲线分析表明上述基因表达下降会导致细胞自噬功能减弱，并与卵巢浆液性癌患者预后不良相关。上述结果提示针对卵巢癌顺铂耐药细胞株，EZH2、Beclin1、Clock等基因可通过影响细胞自噬而逆转肿瘤细胞对抗癌药物化疗作用的敏感性，细胞自噬通过抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移及线粒体凋亡途径在这一过程中发挥重要作用，人卵巢癌组织中相关自噬基因的表达异常与患者预后不良密切相关，这对卵巢癌患者临床监测评估及下一步基因靶向治疗具有重要的指导意义和应用价值。